Plásmido Doble Nickase (m) Desmuslin: sc-433269-NIC

Synm codifica desmuslina, una proteína asociada a filamentos intermedios enriquecida en el disco Z, que contribuye a la integridad del citoesqueleto y a la mecanotransducción en el músculo estriado. En el ratón, la desmuslina interactúa con componentes del complejo distrofina–glicoproteína y con andamiajes sarcolemales relacionados para coordinar la organización de las miofibrillas, la transmisión de la fuerza y la remodelación en respuesta al estrés. Estas funciones vinculan a Synm con vías que regulan la arquitectura de las células musculares, la señalización de adhesión y el mantenimiento de la estabilidad del aparato contráctil. La desregulación de las redes de filamentos intermedios y de las proteínas asociadas al disco Z es ampliamente relevante en modelos de cardiomiopatía y degeneración del músculo esquelético, lo que convierte a Synm en una diana útil para desentrañar mecanismos de fallo del citoesqueleto.

Desmuslin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Synm en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Synm. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Synm. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Synm alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.