Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dermokine (h): sc-406705

Présentation

DMKN code la dermokine, une protéine sécrétée principalement exprimée dans les épithéliums stratifiés, où elle contribue à la différenciation épidermique, au maintien de la barrière cutanée et à l’homéostasie tissulaire. La dermokine est associée aux programmes de maturation des kératinocytes et à des signaux extracellulaires pouvant moduler les signaux inflammatoires ainsi que les interactions épithélio-stromales. Des altérations de l’expression de DMKN ont été rapportées dans des affections cutanées et dans des cancers épithéliaux, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude des dysfonctionnements de barrière, de la dérégulation de la différenciation et du remodelage du microenvironnement tumoral. En tant que facteur enrichi dans la peau, DMKN est fréquemment analysé dans des approches transcriptomiques et protéomiques reliant les transitions d’état épithélial à une signalisation associée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dermokine (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DMKN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DMKN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DMKN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dermokine.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DMKN pour l'étude de la signalisation de Dermokine, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DMKN essentiels à la fonction de Dermokine
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DMKN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dermokine plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dermokine plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DMKN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dermokine plasmide HDR (h) et le Dermokine (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DMKN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DMKN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.