Dermatopontin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402924

Panoramica

DPT codifica la dermatopontina, una proteina della matrice extracellulare ricca di tirosina che lega il collagene e modula l’organizzazione della matrice, l’adesione cellulare e la segnalazione cellula–matrice. La dermatopontina influenza l’assemblaggio e il rimodellamento della matrice extracellulare agendo sulla fibrillogenesi del collagene e interfacciandosi con vie regolate da fattori di crescita, incluse risposte associate a TGF-β che plasmano l’attività dei fibroblasti. Alterazioni dell’espressione di DPT sono state collegate al rimodellamento fibrotico, alla dinamica della guarigione delle ferite e a cambiamenti stromali osservati in molteplici contesti patologici. In quanto componente stromale della ECM, la dermatopontina è rilevante anche per studiare come segnali del microambiente regolino la migrazione cellulare, la meccanotrasduzione e l’architettura dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dermatopontin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DPT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DPT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DPT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dermatopontin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DPT per lo studio della segnalazione di Dermatopontin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DPT critici per la funzione di Dermatopontin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DPT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dermatopontin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dermatopontin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DPT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dermatopontin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dermatopontin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DPT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DPT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.