Plásmido Doble Nickase (m) Derlin-1: sc-426756-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Derlin-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Derlin-1 (m) y el plásmido de doble nickasa Derlin-1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Derl1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ? Anticuerpo (?):
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Derlin-1 | sc-426756-NIC | 20 µg | $410.00 |
Derl1 codifica Derlin-1, un componente de membrana del retículo endoplásmico (RE) de la maquinaria de degradación asociada al RE (ERAD) que ayuda a reconocer y retrotranslocar proteínas luminales y de membrana mal plegadas para su eliminación mediante el sistema ubiquitina–proteasoma. Derlin-1 funciona dentro de redes de proteostasis vinculadas a la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), coordinándose con factores de ubiquitinación y complejos de extracción impulsados por ATPasas para mantener la homeostasis del RE. La alteración del control de calidad dependiente de DERL1 puede aumentar la señalización de estrés del RE y modificar la función de la vía secretora, conectando esta ruta con decisiones de supervivencia celular bajo estrés proteotóxico. En sistemas murinos, Derl1 se estudia con frecuencia en contextos en los que la remodelación de ERAD y UPR influye en la función inmunitaria, la homeostasis metabólica y fenotipos de proteostasis relevantes para la neurobiología.
Derlin-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Derl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Derl1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Derl1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Derl1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.