Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide Double Nickase (h) DENND4B: sc-411384-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DENND4B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DENND4B Double Nickase (h) et le plasmide DENND4B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DENND4B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DENND4B Antibody (F-10): sc-514660
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DENND4B | sc-411384-NIC | 20 µg | $410.00 |
DENND4B code un facteur d’échange de nucléotides guanine (GEF) contenant un domaine DENN, qui régule les petites GTPases de la famille Rab, soutenant le trafic membranaire et le recyclage endosomal. En modulant les états d’activation des Rab, DENND4B contribue aux dynamiques d’arrimage et de fusion des vésicules, lesquelles influencent le renouvellement des récepteurs, la localisation des transporteurs de nutriments et l’intensité de la signalisation issue des compartiments endomembranaires. Ces fonctions de trafic recoupent des voies qui contrôlent l’organisation du cytosquelette, la polarité cellulaire et les réponses adaptatives au stress, faisant de DENND4B un nœud pertinent dans les études de migration cellulaire et d’atténuation des signaux. Une régulation altérée des programmes de transport endosomal associés à DENND4B a été étudiée dans des contextes pathologiques où le trafic membranaire et la signalisation des récepteurs sont déréglés, notamment dans le remodelage cellulaire associé au cancer.
DENND4B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DENND4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DENND4B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DENND4B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DENND4B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.