Plásmido Doble Nickase (h) DDR2: sc-400414-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DDR2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDR2 (h) y el plásmido de doble nickasa DDR2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DDR2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DDR2 Anticuerpo (3B11E4): sc-81707
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DDR2 | sc-400414-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DDR2 | sc-400414-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El receptor 2 del dominio discoidina (DDR2) es una tirosina quinasa receptora activada por colágeno que conecta la detección de la matriz extracelular con la señalización intracelular que controla la adhesión, la migración y la proliferación celulares, así como la remodelación de la matriz. Tras unirse a colágenos fibrilares, DDR2 sufre autofosforilación y activa vías como MAPK/ERK, PI3K–AKT, la señalización de la familia SRC y reguladores del citoesqueleto, influyendo en las transiciones epitelio-mesenquimales y en las interacciones con el estroma. La actividad de DDR2 está estrechamente vinculada a la homeostasis del tejido conectivo y al recambio del colágeno, y las alteraciones en su señalización se han asociado con la remodelación relacionada con la fibrosis y con la dinámica del microambiente tumoral. Como diana humana de DDR2, se estudia con frecuencia en modelos de señalización impulsada por la matriz extracelular, comportamiento invasivo y comunicación cruzada entre tirosina quinasas receptoras.
DDR2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDR2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDR2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDR2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDR2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.