Plasmide CRISPR d'Activation (h) DDR2: sc-400414-ACT

Le récepteur 2 du domaine discoïdine (DDR2) est une tyrosine kinase réceptrice activée par le collagène qui assure la signalisation cellule–matrice, en régulant l’adhérence, la migration, la prolifération et le remodelage de la matrice extracellulaire. Lorsqu’il se lie aux collagènes fibrillaires, DDR2 déclenche une signalisation dépendante de la phosphorylation via des voies telles que MAPK/ERK, PI3K/AKT et les kinases de la famille SRC, influençant la dynamique du cytosquelette et des programmes transcriptionnels associés au remodelage tissulaire. L’activité de DDR2 est impliquée dans les interactions stroma–tumeur et les processus fibrosants par son rôle dans la détection du collagène et le renouvellement de la matrice, et une signalisation DDR2 altérée a été associée à des modifications du comportement invasif et à des phénotypes mésenchymateux. Ces propriétés font de DDR2 une cible utile pour étudier la signalisation induite par le collagène, les transitions de type EMT et la régulation du destin cellulaire par le microenvironnement.

DDR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DDR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DDR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DDR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DDR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DDR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DDR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DDR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DDR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DDR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.