Plasmide Double Nickase (h) DD4: sc-403692-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DD4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DD4 Double Nickase (h) et le plasmide DD4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AKR1C4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DD4 Antibody (WW3): sc-100526
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DD4 | sc-403692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DD4 | sc-403692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1C4 code une aldo-céto réductase (AKR1C4 ; DD4) qui catalyse la réduction, dépendante du NADPH, des aldéhydes et des cétostéroïdes, contribuant au métabolisme hépatique des hormones stéroïdiennes et des acides biliaires. DD4 participe à la détoxification de phase I en modulant l’interconversion des métabolites stéroïdiens actifs et inactifs, et en traitant des composés carbonylés réactifs générés lors du stress oxydatif. Par ses rôles dans la réduction des carbonyles et l’homéostasie des stéroïdes, AKR1C4 influence des réseaux de signalisation métabolique liés à la gestion des lipides et à l’élimination hépatique des xénobiotiques. Une expression ou une activité modifiée d’AKR1C4 a été associée à des profils de métabolites stéroïdiens dérégulés et à des phénotypes métaboliques liés au foie, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur le dialogue croisé entre systèmes endocrinien et métabolique.
DD4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKR1C4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKR1C4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKR1C4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKR1C4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.