Plasmide CRISPR d'Activation (h) DCST2: sc-405719-ACT

DCST2 (protéine 2 contenant un domaine DC‑STAMP) est une protéine membranaire multipasse impliquée dans les processus d’interaction cellule‑cellule et dans des événements liés à la fusion membranaire, les preuves fonctionnelles les plus solides provenant de ses rôles dans l’interaction des gamètes et la biologie de la fécondation. Dans les tissus humains, les profils d’expression de DCST2 étayent l’étude des programmes de régulation du tractus reproducteur et des cellules germinales, notamment l’organisation membranaire et la signalisation au niveau de jonctions cellulaires spécialisées. Bien que les détails mécanistiques fassent encore l’objet de recherches actives, une expression ou une régulation altérée de DCST2 pourrait être pertinente pour des phénotypes associés à l’infertilité et, plus largement, pour des contextes de différenciation épithéliale. En tant que facteur associé à la membrane, DCST2 peut servir à explorer les voies reliant la composition des protéines de surface à la communication cellulaire et à la biologie du développement.

DCST2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCST2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DCST2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCST2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCST2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DCST2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCST2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DCST2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DCST2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DCST2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.