Plasmide Double Nickase (h) DCC: sc-401035-NIC

DCC (« deleted in colorectal carcinoma ») code un récepteur de la nétrine-1 appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui régule le guidage axonal, la migration neuronale et le remodelage du cytosquelette via des voies incluant la signalisation des GTPases de la famille Rho et la dynamique des adhésions focales. En l’absence de ligand, DCC peut agir comme un récepteur de dépendance influençant l’apoptose et la survie cellulaire, reliant la détection de signaux extracellulaires aux décisions de signalisation intracellulaire. Au-delà du neurodéveloppement, DCC contribue à l’adhérence cellulaire et à la migration dirigée dans divers tissus, et une expression altérée de DCC ou des perturbations génomiques ont été associées à la progression tumorale, à des phénotypes invasifs et à des anomalies neurodéveloppementales. Ces caractéristiques font de DCC une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation des signaux de guidage, de la morphogenèse et des modifications pertinentes pour la maladie des programmes de motilité et de survie cellulaires.

DCC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DCC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DCC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DCC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DCC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.