Plasmide CRISPR d'Activation (h) DCC: sc-401035-ACT

DCC (« deleted in colorectal carcinoma ») code un récepteur de la nétrine‑1 et un récepteur de dépendance qui coordonne le guidage axonal, la migration neuronale et le remodelage du cytosquelette via des signaux issus de la matrice extracellulaire. Au-delà de la neurobiologie du développement, la signalisation de DCC s’interface avec des voies contrôlant l’adhésion cellulaire, la polarité et l’apoptose, avec des effets en aval sur la dynamique des GTPases Rho et sur des processus liés aux voies MAPK/PI3K. Une expression ou une fonction altérée de DCC a été associée à une formation perturbée des circuits neuronaux et à la biologie tumorale, où des modifications de la signalisation nétrine–DCC peuvent influencer les signaux de survie, l’invasion et des comportements de type transition épithélio‑mésenchymateuse. Ces caractéristiques font de DCC humain une cible précieuse pour étudier la transduction des signaux de guidage, les interactions cellule‑cellule et les réponses apoptotiques dépendantes du contexte.

DCC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DCC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DCC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DCC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DCC dans les cellules tumorales présentant une expression de DCC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.