Plasmide CRISPR/Cas9 KO DCAF16 (h): sc-412364

Présentation

DCAF16 code un facteur associé à DDB1 et CUL4 impliqué dans la reconnaissance des substrats par la machinerie de ligase E3 ubiquitine CRL4, ce qui le relie à la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et à la régulation du renouvellement des protéines nucléaires. En tant que composant des voies d’ubiquitination de type culline-RING, DCAF16 a été associé à des processus de contrôle qualité qui modulent des programmes transcriptionnels et des voies de signalisation nucléaires sensibles au stress. Une altération de la fonction d’adaptateur d’une ligase à ubiquitine peut perturber le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et le métabolisme de l’ARN, faisant de DCAF16 un nœud pertinent pour des études mécanistiques en biologie du cancer et d’autres troubles impliquant une dérégulation de l’homéostasie protéique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DCAF16 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCAF16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCAF16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCAF16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DCAF16.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCAF16 pour l'étude de la signalisation de DCAF16, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DCAF16 essentiels à la fonction de DCAF16
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCAF16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DCAF16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DCAF16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCAF16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DCAF16 plasmide HDR (h) et le DCAF16 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCAF16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCAF16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.