Plasmide CRISPR d'Activation (h) DC-STAMP: sc-402527-ACT

DCSTAMP code pour DC-STAMP, une protéine transmembranaire multipasse essentielle aux événements de fusion cellule–cellule qui génèrent des ostéoclastes multinucléés et des cellules géantes à corps étranger à partir de précurseurs monocytes/macrophages. DC-STAMP intègre des signaux issus de l’ostéoclastogenèse induite par RANKL et de la signalisation inflammatoire afin de coordonner la différenciation et la fusion, influençant la résorption osseuse et le remodelage du microenvironnement immunitaire. Une activité dérégulée de DC-STAMP est associée à une altération de la fonction ostéoclastique et a été étudiée dans des contextes de perte osseuse inflammatoire, d’inflammation auto-immune et d’ostéoclastogenèse associée aux tumeurs. En tant que régulateur de la fusion et de la maturation de la lignée myéloïde, DC-STAMP constitue un outil utile pour disséquer les mécanismes de polarisation des macrophages, de multinucléation et les voies pertinentes en ostéo-immunologie.

DC-STAMP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCSTAMP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DC-STAMP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCSTAMP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCSTAMP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DC-STAMP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCSTAMP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DC-STAMP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DC-STAMP dans les cellules tumorales présentant une expression de DCSTAMP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.