Plasmide Double Nickase (h) DC-SIGN: sc-401368-NIC

CD209 code pour DC-SIGN (CD209), un récepteur lectine de type C exprimé principalement par les cellules dendritiques et certaines populations de macrophages, qui se lie aux glycannes riches en mannose et fucosylés présents sur les microbes ainsi qu’à des ligands endogènes. Grâce à une reconnaissance des glucides dépendante du calcium et à une signalisation via des adaptateurs associés, DC-SIGN module la capture d’antigènes, l’endocytose et des voies en aval telles que NF-κB et la signalisation dépendante de Raf-1, qui façonnent les réponses cytokiniques et l’amorçage des lymphocytes T. Ce récepteur contribue à la reconnaissance des agents pathogènes et à la régulation immunitaire au niveau des tissus muqueux et périphériques, en influençant le trafic leucocytaire et l’adhérence cellule–cellule via des interactions avec des membres de la famille ICAM. Des altérations de l’activité et de l’expression de DC-SIGN ont été associées à des variations de susceptibilité aux infections et à des phénotypes immunitaires inflammatoires, faisant de CD209 une cible pertinente pour des études mécanistiques en immunologie.

DC-SIGN Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD209 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD209. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD209. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD209.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.