Plasmide Double Nickase (m) DAP12: sc-423568-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DAP12 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DAP12 Double Nickase (m) et le plasmide DAP12 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tyrobp. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DAP12 Antibody (A-4): sc-166084
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DAP12 | sc-423568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) DAP12 | sc-423568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Tyrobp code DAP12 (TYROBP), une protéine adaptatrice transmembranaire portant un motif d’activation basé sur une tyrosine des récepteurs immunitaires (ITAM), qui couple plusieurs récepteurs activateurs des cellules myéloïdes à la signalisation intracellulaire. Dans la microglie murine, les macrophages, les cellules dendritiques et les cellules de la lignée ostéoclastique, DAP12 s’associe à des récepteurs tels que TREM2, SIRPβ1 et d’autres récepteurs de type immunoglobuline afin de promouvoir des cascades dépendantes de SYK qui régulent la phagocytose, la production de cytokines, la chimiotaxie, la survie et le remodelage du cytosquelette. Cet axe de signalisation interagit avec des voies de l’immunité innée, notamment les réponses médiées par les FcR ainsi que les voies PI3K–AKT et MAPK, modulant le tonus inflammatoire et la surveillance tissulaire. Une activité altérée du réseau TYROBP/DAP12 est largement étudiée dans des contextes tels que la neuroinflammation et les transitions d’état de la microglie, la défense de l’hôte et les troubles du remodelage osseux.
DAP12 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tyrobp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tyrobp. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tyrobp. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tyrobp.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.