Plasmide Double Nickase (h) Dab1: sc-402167-NIC

DAB1 code Disabled-1 (Dab1), une protéine adaptatrice intracellulaire qui relaie les signaux de la voie Reelin afin de coordonner la migration neuronale, la lamination corticale et la croissance des neurites au cours du développement du cerveau humain. Après l’engagement du récepteur, Dab1 subit une phosphorylation sur tyrosine et sert d’échafaudage à des effecteurs en aval impliqués dans les kinases de la famille Src, la voie PI3K–AKT et les processus de remodelage du cytosquelette qui régulent le positionnement et la polarité cellulaires. L’activité de DAB1 interfère avec le trafic endocytique et la dynamique des microtubules/de l’actine, reliant des signaux extracellulaires à des modifications de l’adhésion et de la motilité. Une dérégulation de la signalisation Reelin–DAB1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, faisant de DAB1 une cible utile pour des études mécanistiques sur la formation des circuits neuronaux.

Dab1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.