Plasmide CRISPR d'Activation (h) D5DR: sc-404047-ACT

DRD5 code le récepteur dopaminergique humain D5 (D5DR), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gs/olf pour stimuler l’adénylate cyclase, augmenter l’AMPc et activer une signalisation dépendante de la PKA. D5DR module l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique via la régulation des canaux ioniques et des réseaux de phosphorylation, et interfère avec la voie MAPK/ERK ainsi qu’avec d’autres voies de seconds messagers en aval de la neurotransmission dopaminergique. L’expression et la signalisation de DRD5 sont étudiées dans le contexte du fonctionnement des circuits dopaminergiques, des phénotypes neurocomportementaux et du dialogue entre récepteurs qui façonne les réponses à la signalisation des catécholamines. Une signalisation des récepteurs dopaminergiques dérégulée, incluant une activité D5DR altérée, est pertinente pour la recherche sur les troubles neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ainsi que sur les mécanismes de désensibilisation et de trafic des récepteurs.

D5DR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DRD5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

D5DR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DRD5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DRD5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de D5DR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DRD5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de D5DR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie D5DR dans les cellules tumorales présentant une expression de DRD5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.