Plasmide Double Nickase (h) D4DR: sc-402947-NIC

DRD4 code pour le récepteur dopaminergique D4 (D4DR), un GPCR couplé à Gi/o qui module l’excitabilité neuronale et la signalisation synaptique en inhibant l’adénylate cyclase et en ajustant les voies dépendantes de l’AMPc/PKA. La signalisation de D4DR interagit avec les voies MAPK/ERK ainsi qu’avec la régulation des canaux ioniques, influençant la libération de neurotransmetteurs et la plasticité des circuits au sein du système nerveux central. Des variations de DRD4 et des altérations de la signalisation du récepteur ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, notamment des traits liés à l’attention et au contrôle des impulsions, et sont étudiées dans le contexte d’une dérégulation des voies dopaminergiques. En tant que récepteur de surface cellulaire à la pharmacologie bien caractérisée, D4DR constitue une cible accessible pour disséquer la signalisation dopaminergique, le trafic du récepteur et les réponses transcriptionnelles en aval.

D4DR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DRD4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DRD4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DRD4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DRD4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.