Plasmide Double Nickase (h) D3DR: sc-402172-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) D3DR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide D3DR Double Nickase (h) et le plasmide D3DR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DRD3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: D3DR Antibody (9F4): sc-136170
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) D3DR | sc-402172-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) D3DR | sc-402172-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DRD3 code le récepteur dopaminergique D3 (D3DR), un RCPG couplé à Gi/o qui module l’activité de l’adénylate cyclase, réduit l’AMPc intracellulaire et influence en aval la signalisation via la PKA, la conductance des canaux ioniques et les réponses de la voie MAPK. D3DR participe à la neurotransmission dopaminergique et au dialogue entre récepteurs, ce qui façonne la plasticité synaptique, l’excitabilité neuronale et la signalisation neuroendocrinienne. Une expression ou une signalisation altérée de DRD3 a été associée à des mécanismes de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, notamment une dérégulation du traitement de la récompense, de la cognition et du contrôle moteur. En tant que récepteur de surface cellulaire doté de sorties de signalisation exploitables pharmacologiquement, DRD3 est largement étudié pour la cartographie des voies, le trafic des récepteurs et le biais de signalisation dans des modèles cellulaires humains.
D3DR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DRD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DRD3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DRD3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DRD3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.