Plasmide Double Nickase (m) cytochrome c: sc-419891-NIC

Le gène murin **Cycs** code le cytochrome c, une protéine héminique hautement conservée qui transfère des électrons entre les complexes III et IV de la chaîne respiratoire mitochondriale et soutient la phosphorylation oxydative ainsi que la production d’ATP. Au-delà de la bioénergétique, le cytochrome c participe à l’apoptose intrinsèque en favorisant l’assemblage de l’apoptosome et l’activation des caspases après la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale. La fonction de **Cycs** s’inscrit aussi dans l’homéostasie mitochondriale, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et les réponses au stress métabolique qui orientent les décisions de survie cellulaire. Une signalisation dérégulée du cytochrome c est largement utilisée comme indicateur moléculaire dans des études sur la neurodégénérescence, les lésions d’ischémie–reperfusion, l’activation des cellules immunitaires et le métabolisme des cellules cancéreuses.

cytochrome c Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cycs dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cycs. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cycs. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cycs.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.