Plasmide Double Nickase (h) cytochrome b5: sc-405811-NIC

Le gène humain **CYB5A** code le cytochrome b5, une hémoprotéine ancrée à la membrane qui transfère des électrons de la NADH–cytochrome b5 réductase vers plusieurs enzymes oxydatives du réticulum endoplasmique et de la membrane externe mitochondriale. Il soutient des voies majeures du métabolisme lipidique, notamment la désaturation et l’élongation des acides gras, la biosynthèse du cholestérol et des stéroïdes, ainsi que l’oxydation des xénobiotiques via la modulation des cycles catalytiques du cytochrome P450. En influençant l’équilibre rédox et les flux métaboliques, **CYB5A** contribue à l’homéostasie cellulaire dans les hépatocytes et les tissus stéroïdogènes, où le métabolisme oxydatif est élevé. Une perturbation du transfert d’électrons dépendant de **CYB5A** a été associée à des modifications du métabolisme des médicaments et à des défauts de stéroïdogenèse, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la dérégulation métabolique et la signalisation sensible au rédox.

cytochrome b5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYB5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYB5A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYB5A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYB5A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.