Plasmide Double Nickase (h) Cystinosin: sc-405040-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cystinosin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cystinosin Double Nickase (h) et le plasmide Cystinosin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CTNS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cystinosin Antibody (F-12): sc-100703
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cystinosin | sc-405040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cystinosin | sc-405040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNS code la cystinosine, un transporteur de cystine dépendant du gradient de H+ situé dans la membrane lysosomale, qui assure l’efflux de cystine de la lumière lysosomale vers le cytosol et contribue au maintien de l’homéostasie intracellulaire des thiols. En contrôlant la prise en charge de la cystine au sein du système endolysosomal, la cystinosine influence la fonction lysosomale, l’équilibre rédox et les réponses cellulaires en aval au stress. La perturbation de CTNS dérègle le transport lysosomal des acides aminés et peut modifier la dynamique de la voie autophagie–lysosome, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la protéostasie des organites. Les pertes de fonction de CTNS sont associées à la cystinose, une maladie de surcharge lysosomale caractérisée par une accumulation intracellulaire de cystine et un dysfonctionnement cellulaire multisystémique.
Cystinosin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTNS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTNS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTNS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTNS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.