Cystinosin Plasmide Double Nickase (h): sc-405040-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cystinosin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cystinosin Double Nickase Plasmid (h) e il Cystinosin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CTNS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cystinosin Antibody (F-12): sc-100703
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cystinosin Plasmide Double Nickase (h) | sc-405040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cystinosin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNS codifica la cistinosina, un trasportatore di cistina dipendente dal gradiente di H+ localizzato sulla membrana lisosomiale, che media l’efflusso di cistina dal lume lisosomiale al citosol, contribuendo al mantenimento dell’omeostasi intracellulare dei tioli. Controllando la gestione della cistina all’interno del sistema endolisosomiale, la cistinosina influenza la funzione dei lisosomi, l’equilibrio redox e le risposte cellulari a valle allo stress. L’alterazione di CTNS compromette il trasporto lisosomiale di amminoacidi e può modificare la dinamica della via autofagia–lisosoma, rendendolo un nodo chiave per lo studio della proteostasi degli organelli. La perdita di funzione di CTNS è associata alla cistinosi, una malattia da accumulo lisosomiale caratterizzata da accumulo intracellulare di cistina e disfunzione cellulare multisistemica.
Cystinosin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTNS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTNS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTNS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTNS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.