Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2J2 (h): sc-402955

Présentation

CYP2J2 code une monooxygénase microsomale du cytochrome P450 qui catalyse l’oxydation, dépendante du NADPH, de lipides endogènes et de xénobiotiques, avec une activité époxygénase marquée envers l’acide arachidonique, conduisant à la production d’acides époxyeicosatriénoïques (EET). Ces métabolites participent à la régulation du tonus vasculaire, de la signalisation inflammatoire, de la prolifération cellulaire et des réponses au stress oxydant, reliant l’activité de CYP2J2 aux voies des eicosanoïdes et des médiateurs lipidiques. L’expression de CYP2J2 dans les tissus cardiovasculaires et extra-hépatiques étaye des rôles dans la fonction endothéliale et l’homéostasie métabolique, et des altérations d’expression ou d’activité ont été associées à des phénotypes cardiométaboliques et inflammatoires. En biologie du cancer, la signalisation lipidique dépendante de CYP2J2 a été étudiée en lien avec la survie et la migration des cellules tumorales ainsi qu’avec les interactions au sein du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2J2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP2J2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP2J2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP2J2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP2J2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP2J2 pour l'étude de la signalisation de CYP2J2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP2J2 essentiels à la fonction de CYP2J2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP2J2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP2J2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP2J2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP2J2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP2J2 plasmide HDR (h) et le CYP2J2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP2J2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP2J2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.