Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP2C9: sc-403593-ACT

CYP2C9 code une monooxygénase majeure du cytochrome P450 humain qui catalyse le métabolisme oxydatif de divers xénobiotiques et lipides endogènes, contribuant à la clairance hépatique des médicaments et aux voies de bioactivation. L’enzyme fonctionne dans le réticulum endoplasmique en tant qu’élément de la chaîne de transfert d’électrons des P450 et s’inscrit à l’interface de l’homéostasie rédox, de la signalisation lipidique et des réseaux de détoxification. La variabilité interindividuelle de l’expression et de l’activité de CYP2C9 constitue un déterminant clé de la capacité métabolique et influence la susceptibilité aux effets indésirables médicamenteux ainsi qu’aux interactions médicamenteuses. Une régulation altérée de CYP2C9 est également étudiée dans le contexte des maladies du foie, de l’inflammation et des réponses au stress induites par les xénobiotiques, qui remodèlent les programmes d’expression des gènes métaboliques.

CYP2C9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP2C9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP2C9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP2C9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP2C9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP2C9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP2C9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP2C9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP2C9 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP2C9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.