Plasmide Double Nickase (h) CYP1A1: sc-400511-NIC

CYP1A1 (cytochrome P450 1A1) est une monooxygénase impliquée dans le métabolisme des xénobiotiques, qui catalyse la biotransformation oxydative des hydrocarbures aromatiques polycycliques et d’autres composés aromatiques plans. Son expression est fortement régulée par l’axe de signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR), reliant l’exposition à des ligands environnementaux à des programmes transcriptionnels qui façonnent l’équilibre redox cellulaire et les réponses au stress métabolique. L’activité de CYP1A1 peut générer des intermédiaires réactifs et moduler le stress oxydatif, avec des effets en aval sur la signalisation des dommages à l’ADN et les voies inflammatoires. Des altérations de la régulation de CYP1A1 et de son inductibilité ont été étudiées dans le contexte de la susceptibilité aux toxiques, du métabolisme des cancérogènes et des différences interindividuelles de sensibilité aux substances chimiques.

CYP1A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP1A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP1A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP1A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP1A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.