Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP1A1: sc-400511-ACT

Le CYP1A1 humain code une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif de xénobiotiques et de substrats endogènes, notamment les hydrocarbures aromatiques polycycliques et des molécules de type stéroïdien. Sa transcription est fortement régulée par l’axe de signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR), ce qui fait de CYP1A1 un effecteur clé des programmes de détoxification induits par les ligands et de maintien de l’homéostasie redox. L’activité de CYP1A1 influence les voies de bioactivation et d’élimination qui modèlent les réponses cellulaires aux expositions environnementales, au stress oxydant et aux signaux inflammatoires. Une expression altérée de CYP1A1 a été associée à des différences interindividuelles de sensibilité aux substances chimiques ainsi qu’à des mécanismes pertinents pour le métabolisme des cancérogènes et la susceptibilité aux maladies.

CYP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP1A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP1A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP1A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP1A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.