Plasmide Double Nickase (h) Cyclophilin F: sc-402902-NIC

PPIF code la cyclophiline F, une peptidyl‑prolyl cis‑trans isomérase mitochondriale qui favorise le repliement des protéines et le maintien de la protéostasie dans la matrice et l’environnement de la membrane interne. La cyclophiline F participe à la régulation de la transition de perméabilité mitochondriale et des réponses au stress oxydant, ce qui l’associe au contrôle du potentiel de membrane mitochondriale, de la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et de la signalisation liée à l’apoptose. Par ces mécanismes, PPIF se situe à l’interface du métabolisme énergétique et des voies de survie cellulaire, fréquemment perturbées dans la neurodégénérescence, les modèles de lésions d’ischémie‑reperfusion et le remodelage mitochondrial associé au cancer. Une activité altérée de PPIF a ainsi été utilisée pour étudier comment le stress mitochondrial s’intègre aux programmes inflammatoires et de mort cellulaire dans des systèmes cellulaires humains.

Cyclophilin F Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPIF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPIF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPIF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPIF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.