Cyclophilin F Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402902-ACT

PPIF codifica a ciclofilina F humana, uma isomerase peptidil-prolil cis-trans mitocondrial que contribui para o dobramento de proteínas e para o controle de qualidade no ambiente da matriz mitocondrial e da membrana interna. A ciclofilina F participa da regulação da transição de permeabilidade mitocondrial e influencia a homeostase de espécies reativas de oxigênio, conectando-se às respostas ao estresse celular, à bioenergética e à sinalização apoptótica. Por meio dessas funções, a atividade de PPIF é frequentemente estudada em contextos de disfunção mitocondrial, nos quais alterações na transição de permeabilidade e desequilíbrio redox estão associadas à neurodegeneração, a modelos de lesão por isquemia-reperfusão e a mecanismos de doenças metabólicas. PPIF também serve como um nó para investigar como enzimas de dobramento com função semelhante à de chaperonas ajustam a proteostase e a sinalização mitocondriais sob estresse inflamatório ou oxidativo.

Cyclophilin F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPIF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cyclophilin F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPIF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPIF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cyclophilin F. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPIF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cyclophilin F no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cyclophilin F em células tumorais com expressão de PPIF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.