CX3CR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401206-ACT

CX3CR1 は、フラクタルカイン（CX3CL1）に結合する 7 回膜貫通型 GPCR（CX3C ケモカイン受容体 1）をコードしており、白血球の走化性、接着、ならびに組織の免疫監視を制御します。CX3CR1 シグナルは、Ca2+ 動員、MAPK シグナル、細胞骨格の再構築へと収束する GPCR 連結経路を介して、炎症時の細胞移動（トラフィッキング）や骨髄系細胞のプログラムに影響を与えます。ヒト生物学では、CX3CR1 は主にミクログリアや単球サブセットで研究され、神経—免疫間のコミュニケーションや血管—免疫相互作用を形作る因子として注目されています。CX3CR1–CX3CL1 軸の活性変化は、慢性炎症や神経変性に関連する過程と関連づけられており、疾患状況における免疫細胞挙動の機序研究に有用な標的（ノード）となります。

CX3CR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CX3CR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CX3CR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CX3CR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCX3CR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CX3CR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCX3CR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCX3CR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCX3CR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCX3CR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。