Plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-3 (h): sc-416925

Présentation

CUL3 code la culline-3 (CUL-3), un échafaudage central des complexes de ligase E3 de l’ubiquitine CUL3–RBX1, qui recrutent des protéines adaptatrices à domaine BTB afin de conférer une spécificité de substrat pour l’ubiquitination et la dégradation par le protéasome. Par la dégradation régulée de cibles impliquées dans l’homéostasie redox, le contrôle du cycle cellulaire, la dynamique du cytosquelette et la signalisation du stress, CUL-3 contribue à coordonner des voies telles que le fonctionnement du système ubiquitine–protéasome et les réponses au stress oxydant médiées par NRF2/KEAP1. Une perturbation de l’ubiquitination dépendante de CUL3 peut dérégler la protéostasie et des réseaux de signalisation qui modulent l’inflammation, le métabolisme et l’intégrité du génome. Une activité CUL3 dérégulée et des interactions adaptateur altérées ont été associées dans la littérature à des voies liées au cancer ainsi qu’à des mécanismes de maladies cardiovasculaires et neurodéveloppementales, ce qui soutient son utilité comme nœud pour la dissection des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CUL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CUL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CUL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CUL-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CUL3 pour l'étude de la signalisation de CUL-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CUL3 essentiels à la fonction de CUL-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CUL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CUL-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CUL-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CUL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CUL-3 plasmide HDR (h) et le CUL-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CUL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CUL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.