Plasmide Double Nickase (h) CUL-2: sc-402370-NIC

Le gène humain **CUL2** code la culline-2 (CUL-2), un échafaudage central des complexes ligases E3 ubiquitine de type **CUL2-RING**, qui relient des modules de reconnaissance des substrats tels que **VHL** ou des protéines à **SOCS-box** au transfert d’ubiquitine médié par **RBX1**. Ces complexes régulent la protéostasie en ciblant des protéines spécifiques pour leur ubiquitinylation et leur dégradation par le protéasome, modulant des voies comprenant la détection de l’oxygène et la signalisation du facteur induit par l’hypoxie (**HIF**), la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN. Par son rôle dans le renouvellement dépendant de VHL de **HIF-α** et d’autres substrats, CUL-2 contribue à coordonner l’adaptation cellulaire à la disponibilité en oxygène et à l’état métabolique. La dérégulation des réseaux d’ubiquitinylation dépendants de CUL2 a été associée à une signalisation oncogénique, à des réponses à l’hypoxie altérées et à des défauts de stabilité du génome pertinents en biologie du cancer.

CUL-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CUL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CUL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CUL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CUL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.