CTRL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410749

Descripción general

CTRL (similar a la quimotripsina) codifica una proteasa de serina que participa en el procesamiento proteolítico de las proteínas de la dieta y contribuye a la red más amplia de enzimas digestivas. Como miembro de la familia de peptidasas tipo tripsina, la actividad de CTRL se asocia con la proteólisis extracelular y puede considerarse dentro de las vías que regulan la activación de proteasas, el recambio de sustratos y la regulación por inhibidores endógenos de proteasas. La variación en la expresión o la actividad de las proteasas digestivas se evalúa con frecuencia en estudios de biología pancreática y gastrointestinal, incluidos los mecanismos que influyen en la secreción de enzimas, la activación de zimógenos y la proteostasis de la mucosa. Estos contextos hacen de CTRL un nodo molecular útil para investigar cómo los microambientes dependientes de proteasas afectan la señalización celular y la fisiología tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CTRL (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CTRL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CTRL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CTRL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CTRL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CTRL para la investigación de la señalización de CTRL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CTRL críticos para la función de CTRL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CTRL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CTRL CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CTRL CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CTRL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CTRL (h) y el plásmido HDR CTRL (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CTRL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CTRL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.