Plasmide CRISPR d'Activation (h) CTL2: sc-402652-ACT

SLC44A2 code la protéine 2 de type transporteur de la choline (CTL2), un transporteur membranaire multipasse impliqué dans l’absorption cellulaire de la choline et le métabolisme des phospholipides, soutenant la biogenèse membranaire et la signalisation. L’activité de CTL2 est liée à des voies qui régissent l’homéostasie lipidique, la fonction mitochondriale et les réponses au stress, via la régulation de la disponibilité de la choline pour la synthèse de la phosphatidylcholine. L’expression de SLC44A2 a été associée à la biologie des cellules myéloïdes et endothéliales, notamment à des processus pertinents pour l’inflammation et la thrombose. Des études génétiques et immunologiques ont établi un lien entre CTL2 et des phénotypes hématologiques et vasculaires, ce qui en fait une cible utile pour des investigations mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

CTL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC44A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CTL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC44A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC44A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CTL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC44A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CTL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CTL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC44A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.