Particules Lentivirales d'Activation (m2) CTDSPL2: sc-435953-LAC-2

Chez la souris, le gène Ctdspl2 code CTDSPL2, une phosphatase nucléaire de la famille des haloacides déshalogénases (HAD) impliquée dans la régulation de la transcription par la déphosphorylation de résidus sérine au sein du domaine C‑terminal de l’ARN polymérase II, influençant ainsi des programmes d’expression génique liés au contrôle du cycle cellulaire et à la différenciation. CTDSPL2 s’inscrit dans des réseaux de signalisation médiés par des phosphatases qui coordonnent des processus associés à la chromatine, la maturation de l’ARN et les sorties de voies développementales dans les cellules de mammifères. La dérégulation de l’activité des phosphatases ciblant le CTD est largement pertinente dans des modèles de stress prolifératif et de modifications de l’engagement de lignée, ce qui fait de Ctdspl2 une cible utile pour étudier les mécanismes de contrôle transcriptionnel dépendants de la phosphorylation. L’édition génomique de Ctdspl2 dans des systèmes murins permet d’interroger la fonction de l’activité phosphatase nucléaire, de cartographier les conséquences transcriptionnelles en aval au moyen d’analyses de type RNA‑seq/ChIP, et de disséquer les interactions de voies dans des lignées cellulaires ingénierées ou des modèles génétiques in vivo.

Les particules d'activation lentivirales CTDSPL2 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ctdspl2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CTDSPL2 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ctdspl2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CTDSPL2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ctdspl2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.