Plasmide CRISPR d'Activation (h) CS1: sc-401906-ACT

SLAMF7 (CS1) est un immunorécepteur de surface cellulaire de la famille SLAM, exprimé principalement par les cellules NK (natural killer) ainsi que par certaines sous-populations de la lignée B et par les plasmocytes, où il module la formation de la synapse immunologique et les programmes effecteurs. Grâce à des interactions homotypiques et à une signalisation dépendante d’adaptateurs, CS1 influence les seuils d’activation, la sécrétion de cytokines et les réponses cytotoxiques, en s’intégrant aux voies qui contrôlent la communication des lymphocytes et la surveillance immunitaire. Une expression dérégulée de SLAMF7 a été associée à des modifications du comportement des cellules lymphoïdes et des interactions tumeur–système immunitaire dans les contextes de malignités hématologiques, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel pour étudier la régulation immunitaire. La perturbation expérimentale de SLAMF7 permet des études mécanistiques de l’activation des cellules immunitaires, des réseaux de signalisation des récepteurs et des phénotypes dépendants du microenvironnement.

CS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLAMF7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLAMF7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLAMF7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLAMF7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLAMF7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.