Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRP: sc-401767-ACT

La protéine C‑réactive (CRP) est une pentraxine sécrétée, produite principalement par les hépatocytes dans le cadre de la réponse de phase aiguë, et elle agit comme une molécule soluble de reconnaissance de motifs (PRR) qui se lie à la phosphocholine présente à la surface des microorganismes et des cellules endommagées. En engageant les récepteurs Fcγ et en activant la voie classique du complément via C1q, la CRP relie la détection immunitaire innée à l’opsonisation, à la phagocytose et à l’amplification de l’inflammation. L’expression de la CRP est induite au niveau transcriptionnel par des cytokines pro‑inflammatoires, en particulier l’IL‑6, avec des contributions de l’IL‑1β et du TNF, intégrant des programmes de signalisation dépendants de JAK/STAT et de NF‑κB. Des niveaux de CRP dérégulés sont largement utilisés comme biomarqueur d’inflammation systémique et sont associés aux maladies cardiométaboliques, aux infections et à la physiopathologie auto‑immune, ce qui soutient des études mécanistiques sur la régulation de l’inflammation.

CRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CRP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CRP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CRP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CRP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRP dans les cellules tumorales présentant une expression de CRP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.