Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRM1: sc-400348-ACT

Le gène humain **XPO1** code l’exportine **CRM1**, un récepteur d’export nucléaire de la famille des karyophérines-β qui se lie aux signaux d’export nucléaire riches en leucine et assure, de manière dépendante de **RanGTP**, le transport de protéines et d’ARN du noyau vers le cytoplasme. CRM1 régule le trafic nucléocytoplasmique de facteurs clés du cycle cellulaire et de la réponse au stress, modulant des voies telles que la signalisation **p53**, la régulation de **NF-κB**, la signalisation **MAPK** et la biogenèse des ribosomes. En contrôlant la localisation subcellulaire de facteurs de transcription et de suppresseurs de tumeurs, XPO1 influence la prolifération, l’intégrité du génome et la protéostasie. Une activité XPO1/CRM1 dérégulée et des programmes d’export nucléaire altérés sont fréquemment associés à des états de signalisation oncogénique ainsi qu’à d’autres maladies caractérisées par une réponse cellulaire au stress perturbée.

CRM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XPO1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XPO1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XPO1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XPO1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de XPO1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.