Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRIF1: sc-403582-ACT

GADD45GIP1 code pour CRIF1 (CR6-interacting factor 1), une protéine multifonctionnelle impliquée dans la coordination des voies de signalisation de réponse au stress avec la régulation du cycle cellulaire et le contrôle transcriptionnel. CRIF1 a été associée à la modulation de voies liées à GADD45, influençant les points de contrôle, la prolifération et les réponses cellulaires au stress génotoxique et oxydatif. Elle participe également à la biologie mitochondriale via des fonctions au niveau du mitoribosome, avec un impact sur la traduction mitochondriale et l’homéostasie énergétique. Dans la littérature, une activité ou une expression dérégulée de CRIF1 a été corrélée à des altérations du contrôle de la croissance ainsi qu’à des phénotypes inflammatoires ou métaboliques, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans les dysfonctions mitochondriales.

CRIF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GADD45GIP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRIF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GADD45GIP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GADD45GIP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRIF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GADD45GIP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRIF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRIF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GADD45GIP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.