Plasmide CRISPR d'Activation (h) CREB3L2: sc-404393-ACT

CREB3L2 (cAMP responsive element binding protein 3-like 2) est un facteur de transcription bZIP de la famille CREB/ATF, qui intervient dans la signalisation du stress du réticulum endoplasmique (RE) et le maintien de l’homéostasie de la voie sécrétoire. À la suite d’une protéolyse intramembranaire régulée, CREB3L2 peut se transloquer dans le noyau pour moduler des programmes transcriptionnels liés à la réponse aux protéines mal conformées (UPR), au fonctionnement du Golgi/RE et à la différenciation cellulaire. Il contribue à l’adaptation des cellules hautement sécrétoires et s’articule avec des voies qui régissent le contrôle qualité des protéines, l’expression génique induite par le stress et le remodelage métabolique. CREB3L2 est également impliqué dans des fusions géniques oncogéniques telles que FUS–CREB3L2, observée dans le sarcome fibromyxöide de bas grade, ce qui souligne son intérêt pour l’étude de la dérégulation du contrôle transcriptionnel en biologie du cancer.

CREB3L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CREB3L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CREB3L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CREB3L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CREB3L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CREB3L2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CREB3L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CREB3L2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CREB3L2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CREB3L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.