Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPTI-M (m): sc-419787

Présentation

Cpt1b code l’isoforme musculaire de la carnitine palmitoyltransférase 1 (CPTI‑M), une enzyme de la membrane externe mitochondriale qui contrôle l’entrée des acides gras à longue chaîne dans les mitochondries en générant des acylcarnitines. En tant qu’étape limitante de la β‑oxydation mitochondriale, la CPTI‑M relie l’utilisation des lipides à l’homéostasie énergétique cellulaire et interagit fonctionnellement avec la régulation par le malonyl‑CoA, la signalisation AMPK et, plus largement, les programmes métaboliques pilotés par les PPAR. Dans les tissus murins à forte demande oxydative, l’activité de Cpt1b influence le choix des substrats énergétiques, la fonction mitochondriale et la répartition des lipides. Les altérations du flux dépendant de la CPTI‑M sont fréquemment étudiées dans le contexte de dysfonctions métaboliques, de la sensibilité à l’insuline, ainsi que de myopathies liées aux lipides et de phénotypes cardiométaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CPTI-M (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cpt1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cpt1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cpt1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CPTI-M.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cpt1b pour l'étude de la signalisation de CPTI-M, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cpt1b essentiels à la fonction de CPTI-M
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cpt1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CPTI-M plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CPTI-M plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cpt1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CPTI-M plasmide HDR (m) et le CPTI-M (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cpt1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cpt1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.