CPI-17 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401966

Visão geral

PPP1R14A codifica a CPI-17, um inibidor da fosfatase da cadeia leve da miosina (MLCP) dependente de fosforilação, que amplifica a sinalização contrátil ao estabilizar a fosforilação da cadeia leve regulatória da miosina. Após fosforilação por quinases como a PKC e por vias associadas a Rho, a CPI-17 suprime a atividade catalítica da PP1 dentro da MLCP para regular o tônus do músculo liso, a dinâmica do citoesqueleto e a sensibilização ao cálcio. Esse nó regulatório integra a sinalização via GPCR e RhoA/ROCK com a remodelação actomiosínica e programas de motilidade celular. A desregulação da atividade de PPP1R14A/CPI-17 tem sido associada a contratilidade anômala do músculo liso e a contextos de remodelamento proliferativo, sustentando seu estudo em modelos de fisiopatologia cardiovascular, das vias aéreas e gastrointestinal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CPI-17 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PPP1R14A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PPP1R14A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PPP1R14A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CPI-17.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PPP1R14A para a investigação da sinalização de CPI-17, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PPP1R14A críticos para a função CPI-17
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PPP1R14A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CPI-17 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CPI-17 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PPP1R14A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CPI-17 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CPI-17 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PPP1R14A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PPP1R14A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.