Plasmide CRISPR d'Activation (h) Coronin 1A: sc-403011-ACT

Le gène humain **CORO1A** code la coronine 1A, une protéine à répétitions WD liant l’actine, enrichie dans les cellules hématopoïétiques, qui régule le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et la dynamique de la synapse immunitaire. La coronine 1A coordonne des événements de signalisation dépendants de l’actine en aval des récepteurs de l’antigène et des signaux chimiokiniques, influençant le trafic vésiculaire, les flux calciques et les voies de survie dans les leucocytes. Des perturbations de l’expression ou de la fonction de **CORO1A** ont été associées à une dysrégulation immunitaire, notamment des défauts d’homéostasie des lymphocytes T et une susceptibilité accrue aux infections, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes inflammatoires et liés aux immunodéficiences. En tant que régulateur associé au cytosquelette, **CORO1A** est également utilisé comme nœud pour relier la dynamique de l’actine aux réseaux de signalisation qui contrôlent l’activation et la motilité des lymphocytes.

Coronin 1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CORO1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Coronin 1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CORO1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CORO1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Coronin 1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CORO1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Coronin 1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Coronin 1A dans les cellules tumorales présentant une expression de CORO1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.