Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 40 (h): sc-401031
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- connexin 40 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique connexin 40, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: connexin 40 Antibody (B-3): sc-365107
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 40 (h) | sc-401031 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
GJA5 code la connexine 40 (Cx40), une protéine des jonctions communicantes qui s’assemble en canaux intercellulaires permettant le passage direct d’ions et de petits métabolites entre cellules voisines. Le couplage médié par Cx40 favorise une conduction électrique rapide et une signalisation coordonnée, en particulier dans les oreillettes cardiaques et le système de conduction spécialisé, et contribue aussi à la communication endothéliale qui module le tonus vasculaire et le remodelage. En régulant la connectivité cellule–cellule et la propagation de l’influx, une altération de la fonction de GJA5 est associée à des phénotypes liés aux arythmies, notamment des anomalies de la conduction atriale, et a été étudiée dans le contexte de malformations cardiaques congénitales et de dysrégulations vasculaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 40 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GJA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GJA5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GJA5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine connexin 40.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GJA5 pour l'étude de la signalisation de connexin 40, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de GJA5 essentiels à la fonction de connexin 40
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GJA5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le connexin 40 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le connexin 40 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GJA5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le connexin 40 plasmide HDR (h) et le connexin 40 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GJA5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GJA5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.