Plasmide Double Nickase (h) connexin 26: sc-402132-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) connexin 26 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide connexin 26 Double Nickase (h) et le plasmide connexin 26 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GJB2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: connexin 26 Antibody (1C6): sc-293223
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) connexin 26 | sc-402132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) connexin 26 | sc-402132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJB2 code la connexine 26, une sous-unité de canal de jonction communicante qui s’oligomérise en connexons afin de permettre l’échange intercellulaire direct d’ions et de petits métabolites. Les jonctions communicantes contenant la connexine 26 coordonnent l’homéostasie tissulaire en soutenant le couplage électrique et métabolique, en régulant la physiologie de la barrière épithéliale et en modulant la signalisation du calcium et des seconds messagers. Dans l’oreille interne et les épithéliums stratifiés, la connexine 26 contribue au recyclage des ions potassium et à des programmes de différenciation cellulaire importants pour les fonctions sensorielles et cutanées. L’altération de GJB2 est fortement associée à la surdité héréditaire et à des phénotypes ectodermiques syndromiques, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de la biologie des jonctions communicantes et des réseaux de signalisation spécifiques des tissus.
connexin 26 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GJB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GJB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GJB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GJB2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.