connexin 26 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420565

Descripción general

Gjb2 codifica la conexina 26 (Cx26), una proteína de uniones comunicantes (gap junction) que se ensambla en conexones hexaméricos para formar canales intercelulares que permiten el intercambio directo de iones y pequeños metabolitos. Al coordinar el acoplamiento eléctrico y metabólico, Cx26 contribuye a la homeostasis tisular, la función de barrera epitelial y la sincronización de las respuestas celulares ante señales de estrés y de diferenciación. La conexina 26 participa en procesos relacionados con la señalización del calcio, el equilibrio redox y la regulación, mediada por el contacto celular, de la proliferación y la apoptosis. La alteración de la función de Gjb2 se asocia estrechamente con hipoacusia sindrómica y no sindrómica, y también se ha implicado en trastornos de la diferenciación epidérmica en los que la comunicación a través de uniones comunicantes alterada contribuye a la patología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO connexin 26 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gjb2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gjb2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gjb2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína connexin 26.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gjb2 para la investigación de la señalización de connexin 26, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gjb2 críticos para la función de connexin 26
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gjb2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido connexin 26 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido connexin 26 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gjb2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR connexin 26 (m) y el plásmido HDR connexin 26 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gjb2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gjb2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.