Plasmide CRISPR d'Activation (m) connexin 26: sc-420565-ACT

La souris Gjb2 code la connexine 26, une protéine tétraspannique des jonctions communicantes qui s’assemble en connexons pour former des canaux intercellulaires permettant l’échange direct d’ions et de petits métabolites. Grâce à une communication intercellulaire coordonnée via les jonctions communicantes, la connexine 26 contribue à réguler l’homéostasie épithéliale, le recyclage du potassium dans la cochlée et une signalisation synchronisée influençant les flux de calcium, l’équilibre rédox et les réponses au stress. La fonction de la connexine 26 s’articule également avec des processus tels que la formation de la barrière, la réponse aux lésions et l’organisation du développement, en modulant le couplage cellule–cellule ainsi que la coordination électrique et métabolique à l’échelle tissulaire. Une activité dérégulée de GJB2/connexine 26 est largement étudiée dans le cadre des déficiences auditives héréditaires et des troubles de la barrière cutanée, et fait aussi l’objet de recherches pour ses rôles possibles dans l’inflammation et la communication au sein du microenvironnement tumoral.

connexin 26 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gjb2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

connexin 26 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gjb2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gjb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de connexin 26. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gjb2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de connexin 26 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie connexin 26 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gjb2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.