Plasmide CRISPR/Cas9 KO Complexin-2 (h): sc-406799

Présentation

CPLX2 code la complexine‑2, une protéine cytosolique présynaptique qui se lie aux complexes SNARE assemblés afin de réguler l’amorçage des vésicules synaptiques et l’exocytose déclenchée par le calcium. En modulant la probabilité de fusion des vésicules et la libération synchrone des neurotransmetteurs, la complexine‑2 contribue à la neurotransmission dépendante de l’activité et à la plasticité synaptique à court terme. Les dysfonctionnements liés à CPLX2 ont été étudiés dans le contexte d’une altération de l’équilibre excitation/inhibition et de phénotypes au niveau des circuits pertinents pour les troubles neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ainsi que de modifications synaptiques associées à la neurodégénérescence. Ces caractéristiques font de CPLX2 un nœud utile pour disséquer, dans des modèles cellulaires humains, la fusion membranaire médiée par les SNARE, la signalisation dépendante du Ca2+ et le contrôle du cycle des vésicules présynaptiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Complexin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CPLX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CPLX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CPLX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Complexin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CPLX2 pour l'étude de la signalisation de Complexin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CPLX2 essentiels à la fonction de Complexin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CPLX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Complexin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Complexin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CPLX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Complexin-2 plasmide HDR (h) et le Complexin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CPLX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CPLX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.