Plasmide CRISPR d'Activation (h) COMMD1: sc-404544-ACT

COMMD1 (copper metabolism domain containing 1) est une protéine adaptatrice humaine multifonctionnelle qui coordonne la signalisation dépendante de l’ubiquitine et le trafic des protéines. Elle est surtout connue pour moduler la production transcriptionnelle de NF-κB via des interactions avec le complexe IKK et les ligases ubiquitine Cullin-RING, façonnant ainsi des programmes géniques liés à l’inflammation et à la réponse au stress. COMMD1 contribue également au tri endosomal et au renouvellement des protéines membranaires, avec des effets en aval sur des voies telles que la signalisation de l’hypoxie et l’homéostasie des ions métalliques. Une activité de COMMD1 dérégulée a été associée, dans des systèmes expérimentaux, à une altération de la signalisation inflammatoire, à des perturbations de la gestion du cuivre et à des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer et la fonction hépatocellulaire.

COMMD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COMMD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COMMD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COMMD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COMMD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COMMD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COMMD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COMMD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COMMD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COMMD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.