Particules Lentivirales d'Activation (h) COLEC11: sc-413098-LAC

COLEC11 code la collectine-11, une lectine de type C sécrétée jouant le rôle de molécule de reconnaissance de motifs (pattern-recognition) et se liant à des motifs glucidiques d’origine microbienne ou associés au soi altéré, afin de favoriser la surveillance immunitaire innée. En formant des complexes avec les protéases MASP, COLEC11 peut initier l’activation du complément par la voie des lectines, influençant l’opsonisation, la signalisation inflammatoire et l’élimination des débris apoptotiques. L’activité de COLEC11 s’inscrit aussi à l’interface des interactions avec la matrice extracellulaire et des processus du développement, et des perturbations des composants de la voie des lectines sont associées à une dérégulation immunitaire et à une susceptibilité accrue aux infections. Des variations génétiques de COLEC11 ont également été liées à des phénotypes développementaux, ce qui étaye son intérêt pour des études sur la biologie du complément, les interactions hôte–pathogène et l’homéostasie tissulaire.

Les particules d'activation lentivirales COLEC11 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de COLEC11 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales COLEC11 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription COLEC11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de COLEC11. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif COLEC11 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.