Plasmide Double Nickase (h) COL8A2: sc-403831-NIC

COL8A2 code la chaîne α2 du collagène de type VIII, un collagène non fibrillaire à chaîne courte qui contribue à des assemblages spécialisés de la membrane basale et de la matrice extracellulaire (MEC). Il est fortement exprimé dans les tissus oculaires, où il soutient la structure de l’endothélium cornéen et de la membrane de Descemet, et module les interactions cellule–matrice qui influencent l’adhésion, la migration et la différenciation. Le remodelage de la MEC lié à COL8A2 s’articule avec la signalisation médiée par les intégrines, la dynamique des adhésions focales et des programmes matriciels répondant au TGF-β, qui façonnent la biomécanique tissulaire et les réponses cellulaires au stress. Les variations génétiques et une expression dérégulée de COL8A2 sont associées à des dystrophies endothéliales cornéennes, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier l’homéostasie de la MEC, la protéostase et la biologie des cellules endothéliales dans des modèles humains.

COL8A2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL8A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL8A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL8A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL8A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.